Preskočiť na obsah

Huba Huaier v terapii rakoviny

Obsah

Čas čítania 25 zápisnice

Aktualisiert – apríl 13, 2026

Huba Huaier je známa už viac ako 1 600 rokov a od svojho vypestovania sa úspešne používa pri liečbe rakoviny.

História

Prvýkrát sa spomína v lekárskom diele okolo roku 240 n. l. Zhou Hou Fang lekára Ge Hong. Názov sa vzťahuje na obdobie po dynastii Čou. V preklade znamená „Príručka pohotovostnej medicíny“, ktorá sa zameriava na predpisy prvej pomoci a dodnes sa na ňu odkazuje v lekárskych kontextoch.
Nájdete ho aj v knihe Tang Ben Cao (dynastia Tang), ktorá bola považovaná za referenčné dielo o bylinnej medicíne.

Huby Huaier (Trametes robiniophila Murr) sa používal na liečbu chronických ochorení, na urýchlenie rekonvalescencie a na celkové posilnenie. Okrem iného sa o ňom hovorilo, že podporuje krvný obeh a odstraňuje príznaky základných príčin nádorov.
Kvôli nedostatočnej dostupnosti - huba rástla len v odľahlých oblastiach na kmeňoch starých exemplárov stromu Sophora čínska - sa na ňu čoskoro zabudlo.

Koncom 70. rokov 20. storočia čínski vedci vyvinuli metódu pestovania liečivej huby. Štandardizovaná produkcia s konzistentnou kvalitou účinnej látky je možná od začiatku 90. rokov 20. storočia.

Stránka Polysacharidový proteín-komplex (PS-T), pozostávajúci z polysacharidov a proteínov, je hlavnou účinnou látkou: kombinácia 6 Monosacharidy existujúce Heteropolysacharid a jeden z 18 Aminokyseliny kompozitné Proteín.

Výrobca

Výrobcom granulátu Huaier je spoločnosť založená v roku 1995. Gaitianli Medicine Co, Ltd. so sídlom v meste Qidong, Jiangsu. Spoločnosť má na ploche približne 130 000 m2 výskumné, vývojové a výrobné zariadenia, skúšobné laboratóriá a sklady, v ktorých pracuje 1 700 zamestnancov. Výrobná kapacita predstavuje 9 500 ton húb Huaier a 250 miliónov vriec granúl.

Výskum sa zameriava na liečbu nádorových a imunitných ochorení. V štúdiách Huaierove granule preukázali sľubné výsledky pri liečbe rakoviny a blokovaní recidív (Zdroj).
Huaierova huba sa považuje za ústredný bod výskumu, najmä v oblasti liečby rakoviny prsníka.

Produkt bol pôvodne vyrobený ako referenčná látka pre klinické štúdie (polysacharidy 32% a β-glukány 8%) a nakoniec bol v Číne oficiálne schválený ako adjuvantný terapeutický prostriedok v onkológii.

Dnes sa predáva prostredníctvom lekární (PZN 19253502 - len polysacharidy 30%) a online platforiem (Granule Nutrimentas (koncentrácia identická s obsahom štúdie s polysacharidmi 32%)) sú rozšírené po celom svete.
Granulát Nutrimentas spĺňa vedecký štandard originálneho výrobcu Gaitianli Medicine Co., Ltd. (32% polysacharidov) a obsahuje 58% beta-glukánov!

Es gibt vermeintlich „günstige“ Anbieter von Huaier-Granulat. Unterschied zwischen dem „teuren“ und „günstigen“ Produkt ist, dass das teure aus dem Fruchtkörper des Huaier-Pilzes gewonen wird, während das günstige aus dem Myzel auf z.B. Getreide hergestellt wird, dessen Wirkstoffgehalt z.T. nur ein Zehntel beträgt und 90% an, bei der Festkörperfermentation, unverdautem Füllstoff enthält.

Hingegen sind bei Flüssigfermentation, bei dem Myzel in nährstoffreichen Flüssigmedien kultiviert wird, wiederum Wirkstoffe enthalten, die nicht aus dem Fruchtkörper gewonnen werden können.

Als „Fruchtkörper“ bezeichnet man den Pilz, wie er optisch wahrgenommen wird, als „Myzel“ das Innere des Pilzes.

Štúdie

Najnovšia štúdia z roku 2024, ktorá bola odvtedy niekoľkokrát potvrdená a prvýkrát publikovaná v roku 2022, je v súčasnosti Štúdia Tanaka Dr. Manami Tanaka, M.D., Ph. D., Kanagawa, Japonsko, ktorá pracuje v biomedicínskom výskume. Jeho veľmi podrobná práca, pri príležitosti ktorej modRNA-očkovanie (Corona) ribozomálna RNA (rRNA) vo vzťahu k účinku huby Huaier ukázal, v rozpore so skutočným zámerom jeho práce, že rakovina reaguje aj na Huaier.

Štúdia ukázala, že užívanie extraktu Huaier u pacientov s rakovinou má niekoľko účinkov: normalizuje funkciu ribozómov, znižuje tvorbu škodlivých proteínov hrotov a pri ďalšom užívaní zabraňuje recidíve rakoviny.

S výnimkou nádorov mozgu, kde molekuly pravdepodobne nemôžu prechádzať cez hematoencefalickú bariéru kvôli veľkosti molekúl Huaierových účinných látok (TP-1: 2300 kDa, HP-1: 30 kDa*), Huaierova huba pôsobí „všestranne“, nie selektívne len na niekoľko typov rakoviny.
Účinné látky totiž zabezpečujú len funkčnú normalizáciu bunkových funkcií. Znie to veľmi stručne, ale je to veľmi zložité, ako jasne ukazuje štúdia.

*kDa sa používa na označenie hmotnosti molekúl, najmä proteínov. Jednotka Dalton (Da) je definovaná ako dvanástina hmotnosti izotopu uhlíka 12C a je 1,66053906660(50) - 10-²⁷ kg. kDa je prakticky totožná s kg/mol.

Ďalšie štúdie:

Funkcia - vysvetlenie pre zdravotníckych laikov

Právne informácie: Tieto informácie slúžia na vzdelávacie účely a nenahrádzajú rady odborného lekára/onkológa. Granule Huaier sú v Nemecku kategorizované ako doplnok stravy a nie ako liek, ako je to v Číne. Individuálne lekárske rozhodnutia by sa mali vždy prediskutovať s ošetrujúcim onkológom.

Oprávnená otázka čitateľa: „... a prečo túto hubu nepoužívajú lekári a kliniky?“
Keďže je v Nemecku povolený len ako doplnok stravy (nie ako v Číne ako liek proti rakovine), neexistuje možnosť jeho účtovania podľa GOÄ alebo EBM (sadzobníky poplatkov pre lekárov) a viac peňazí sa dá zarobiť na bežných chemoterapeutických liekoch v päťmiestnom rozmedzí ako na relatívne „mizerných“ ročných nákladoch 2 200 eur za liečbu Huaierom v prvom roku a len niekoľko sto eur v ďalších rokoch.
Len málo lekárov, ktorí pracujú mimo rámca čisto konvenčnej medicíny a sú orientovaní na fakturáciu, si možnosť tejto terapie nielen uvedomuje, ale ju aj podporuje.

Rakovinové bunky oslabujú kontrolný mechanizmus tela, tzv. imunitnú obranu. Hippo-Pathway (ktorý určuje, či je bunka v poriadku alebo chybná, a teda jej smrť, pozn. prekl. Apoptóza, ), a tým zabraňujú apoptóze, preto sa naďalej nekontrolovane a neobmedzene delia a množia.

Spoločnosť Huaier sa stará o opravu Hippo-Pathways a umožňuje tak bunke obnoviť jej správnu funkciu, zapínať a vypínať rôzne gény a správne rozpoznávať a odstraňovať chybné bunky (Apoptóza).

Aby toho nebolo málo, tzv. Zabijácke bunky tela (imunitné bunky, NK bunky) sú u pacientov s rakovinou vyčerpané a nemôžu ďalej plniť svoju úlohu ničiť rakovinové bunky.

Huaier aktivuje tieto zabijacke bunky prostredníctvom svojho β-glukány, To umožňuje preškolenie imunitného systému a aktívne napadnutie a zničenie rakovinových buniek, ako sú metastázy.

Existuje 8 hlavných mechanizmov, pomocou ktorých Huaierova huba úspešne vykonáva svoju úžasnú prácu, popísaných nižšie vo výňatkoch a ľahko pochopiteľných.

1. obnovenie bunkovej pamäte

Bunka má špecifické úlohy, ktoré sú uložené v bunkovom jadre v RNA (- RiboNukleová kyselina = DNA - DeoxyriboNukleová kyselina). Jej časť kóduje bielkoviny, ktoré určujú funkciu a štruktúru bunky zapínaním alebo vypínaním určitých génov.
Aby sa tomu predišlo, je potrebné vytvoriť strážcu (Hippo-Pathway), aby sa zabezpečilo, že bunka bude plniť len svoju určenú funkciu. Ak sa jej to nepodarí, má približne pol hodiny na nápravu chyby. Ak zostane chybná, nastane smrť bunky (Apoptóza), aby sa zabránilo množeniu bunky s nesprávnymi informáciami.
Ak však strážca brány zlyhá, nesprávne zakódovaná bunka sa bude ďalej neúprosne deliť.

Huaierova huba reaktivuje vrátnika, a tým obnovuje kontrolu nad funkciou bunky.

2. genetický chaos

Ak sa v dôsledku nesprávnej informácie aktivujú alebo deaktivujú nesprávne gény alebo sa nesprávne zapnú alebo vypnú, produkujú sa iné proteíny, ako je potrebné. Dochádza k narušeniu transkripčných faktorov. V dôsledku toho bunka stráca funkciu, ktorá jej bola pridelená.

Na rozdiel od digitálnych logických obvodov sa však gény nezapínajú a nevypínajú len binárne, ale aj jemne nastavujú, podobne ako pri regulácii hlasitosti, t. j. nastavujú sa na veľmi tichý, tichý, stredný atď. V závislosti od tohto nastavenia zabezpečujú reakciu (prejav) na vysielané signály, ktorá je prispôsobená príslušnej situácii.

Účinné látky huby Huaier správne reaktivujú tisíce génov, čím ich vrátia do prirodzeného stavu a umožnia bunke obnoviť jej pôvodne určenú funkciu.

3. brzda metastáz

Signalizačné cesty PI3K, ACT a mTOR sa používajú na vnútrobunkovú komunikáciu, ktorá určuje napríklad rast, správanie pri delení a metabolické procesy. Ak sú tieto narušené, bunka nemôže plniť svoju pôvodnú funkciu. Ak sú signálne dráhy hyperaktívne, koordinácia procesov nie je možná, čo má za následok, že bunka sa vymkne spod kontroly a rýchlo sa delí (vytvára metastázy).

Huaier inhibuje túto hyperaktivitu signálnych dráh, a tým zabraňuje nekontrolovanému rastu buniek vrátane ich delenia a množenia v organizme.

4. riadiaci systém miRNA

V porovnaní s autom miRNA-kontrolný systém (microRNA) predstavuje riadenie ABS (otáčajúce sa kolesá sú brzdené, zatiaľ čo záberové kolesá sú napájané hnacou silou). Zabraňuje tomu, aby sa bunky dostali do šmyku v dôsledku nesprávnych informácií.
V ľudskom genóme je zakódovaných približne 1 000 miRNA, ktoré riadia stav prepínania génov.

Pre rakovinu Onkogény (zmutované gény, ktoré spôsobujú, že rast bunky sa vymkne spod kontroly) už nie sú spomalené, čo podporuje rast a šírenie rakoviny.

Zároveň Tumor supresorové gény (gény, ktoré riadia rast a delenie buniek) sú príliš silno potlačené, čo umožňuje nekontrolovaný rast rakoviny.

Huaierova huba obnoví chybné gény do ich zamýšľanej polohy, čím zastaví nekontrolovaný rast bunky a zabráni jej ďalšiemu deleniu.

5. vyčerpaný imunitný systém

Imunitný systém je nakoniec preťažený viacerými poruchami a nedokáže už adekvátne bojovať proti rakovine alebo ju udržať pod kontrolou. Najmenšia infekcia, či už ide o prechladnutie, sa môže rozvinúť do plnohodnotného zápalu pľúc - v tejto situácii často s fatálnymi následkami.

Látky huby Huaier aktivujú NK bunky (prirodzené zabíjačské bunky) a Makrofágy (Záchytné bunky), ktoré ničia rakovinové bunky (Apoptóza) a absorbovať ich, aby sa rozložili. To umožňuje imunitnému systému obnoviť jeho ochrannú funkciu a účinne bojovať proti rakovine.

6 Putovanie rakovinových buniek

Metastázovanie je výskyt rakovinových buniek na iných miestach, ako je pôvodné miesto vzniku nádoru. Za normálnych okolností rakovinové bunky priľnú k tkanivu, v ktorom vznikli. Časom však dochádza k EMT (Epitelovo-mezenchýmový prechod) pre stratu lepidla, ktoré drží bunku na mieste. V dôsledku toho sa pohybuje po organizme a vytvára pohybový proteín, ktorý jej ešte viac uľahčuje pohyb ďalej.

Huaierova huba inhibuje tento proces EMT, a tým zabraňuje metastázovaniu.

7 Systém zásobovania rakovinových buniek

Migrujúce rakovinové bunky chcú žiť, a preto vytvárajú nové cievy (Angiogenéza), aby sa o seba postarali. Takto vznikajú nové rakovinové nádory na rôznych miestach v tele.

Huaier inhibuje rastový faktor VEGF, ktorý je regulovaný hypoxiou indukovaným faktorom HIF-1α. Tým sa preruší zásobovanie vzniknutých vredov, a preto nádor odumiera.

8 Defekt ribozomálnej RNA po chemoterapii

Chemoterapeutiká poškodzujú ribozomálnu RNA, pretože nie sú selektívne zamerané na DNA, ale ovplyvňujú aj iné bunkové štruktúry.
Niektoré chemoterapeutiká, ako napr. Aktinomycín D, DNA syntetizuje proteíny vrátane ribozomálnej RNA (rRNA), ktorá je nevyhnutná na výrobu proteínov.
Bunka tak stráca schopnosť syntetizovať proteíny, čo vedie k jej smrti.

Podľa súčasného výskumu je akútna toxicita Azacitidín sprostredkovaná takmer výlučne prostredníctvom poškodenia RNA. Poškodenie RNA zrejme zohráva hlavnú úlohu pri účinku takýchto liekov. Iné látky, ako napr. Antracyklíny, pôsobia tvorbou voľných radikálov, ktoré môžu poškodiť DNA aj RNA.
Toto poškodenie ribozomálnej RNA narúša funkciu ribozómov, ktoré sú zodpovedné za transláciu (Preklad) mRNA na proteíny, čo môže v konečnom dôsledku viesť k smrti bunky.

Huaierova huba opravuje poškodenie ribozomálnych štruktúr, čo pomáha regenerácii zdravých buniek, ale spôsobuje odumieranie rakovinových buniek.

Rozsah aplikácií od spoločnosti Huaier

Podľa vyššie uvedených štúdií sa Huaier môže používať pri nasledujúcich typoch rakoviny:

Rakovina prsníka - karcinóm prsníka

Kolorektálny karcinóm - Kolorektálny karcinóm

Lkarcinóm pečene - hepatocelulárny karcinóm (HCC)

Karcinóm pľúc - bronchiálny karcinóm / karcinóm pľúc

Karcinóm žalúdka - Karcinóm žalúdka / adenokarcinóm žalúdka

Karcinóm nosohltana - Karcinóm nosohltana

  • PoznámkaKarcinóm nosohltana sa spomína v meta-analýzach (napr. v systematických prehľadoch), ale špecializované klinické štúdie v spojení s Huaier momentálne nie sú dostupné.

Rakovina vaječníkov - karcinóm vaječníkov

  • Xiaohui Yan, e.a. - 08/05/2013 - „Vodný extrakt Huaier inhibuje pohyblivosť buniek rakoviny vaječníkov prostredníctvom dráhy AKT/GSK3β/β-Catenin„
    „Súhrnne povedané, Huaier nielenže inhibuje rast buniek znížením proliferácie a indukciou apoptózy, ale tiež znižuje mobilitu buniek v bunkách rakoviny vaječníkov prostredníctvom signálnej dráhy AKT/GSK3β/β-katenín. Vďaka nízkej toxicite je Huaier vďaka svojmu účinku na signalizáciu GSK3β/β-katenínu atraktívnou možnosťou na cielené ovplyvňovanie invázie epitelových buniek rakoviny vaječníkov.“

Metastázy

Metastázy sú dcérové nádory, ktoré vznikajú, keď sa zhubné nádorové bunky uvoľnia z primárneho nádoru a migrujú cez krvné cievy alebo lymfatické cesty do iných častí tela, kde sa opäť usadia a rozmnožia, čo platí pre % 0,01 .. 0,1 cirkulujúcich rakovinových buniek.

Tento proces výrazne zhoršuje šance na vyliečenie rakoviny, keďže takmer 90 percent všetkých úmrtí na rakovinu je spôsobených týmito metastázami, nie primárnym nádorom.

Obľúbené cieľové oblasti metastáz sú pečeň, pľúca, kosti, mozog a lymfatické uzliny. 

Benígne nádory nevytvárajú metastázy.

Klinické účinky Huaieru na metastázy (najmä v pečeni)

Randomizovaná multicentrická klinická štúdia ukázala, že Huaier granule znižujú mieru recidívy u pacientov po kuratívnej resekcii hepatocelulárneho karcinómu (HCC).

Zdroj: Chen Quian, a kol. – BMJ Journals – Hepatológia – nov. 2018 – Vplyv granúl Huaier na recidívu po kuratívnej resekcii HCC: multicentrická, randomizovaná klinická štúdia

Kombinácia n-butanolového extraktu Trametes robiniophila Murr s 5-fluóruracilom v xenograftoch rakoviny žalúdka významne znížila riziko vzniku pečeňových metastáz in vivo PubMed.

Zdroj: Jing-Li Xu, e.a.- Frontiers in Pharmacology - 17/05/2022 - Trametes robiniophila Murr senzibilizuje bunky rakoviny žalúdka na 5-fluóruracil prostredníctvom modulácie mikroprostredia nádoru

Molekulárne mechanizmy proti metastázovaniu

Experimenty in vitro a in vivo ukazujú, že Huaier priamo inhibuje proliferáciu nádorov, indukuje smrť nádorových buniek, zabraňuje metastázam a zasahuje do angiogenézy prostredníctvom rôznych signálnych dráh.

Zdroj: Jun Pan, a spol. – Cancer Manag Res. – 14.02.2019 – Trametes robiniophila Murr: tradičný čínsky liek so silnými protinádorovými účinkami

Polysacharidy Huaier inhibovali proliferáciu, adhéziu, migráciu a inváziu buniek HCC v závislosti od dávky znížením expresie AEG-1 a N-kadherínu a zvýšením expresie E-kadherínu.

Zdroj: Jiasheng Zheng, e.a. - International Journal of Biological Macromolecules - marec 2014 - Polysacharidy Huaier potláčajú metastázy hepatokarcinómu MHCC97-H prostredníctvom inaktivácie dráh EMT a AEG-1.y

Špecifické výsledky pľúcnych metastáz

Huaier-polysacharid (TP-1) u myší s HCC tumormi signifikantne potlačil rast nádorov a pľúcnu metastazu bez toxicity, pričom zlepšil proliferáciu imunitných orgánov (slezina, thymus).

Zdroj: Cong Li, e.a. - International Journal of Biological Macromolecules - 04.2015 - Polysacharid Huaier potláča rast a metastázovanie hepatocelulárneho karcinómu potlačením angiogenézy.

Najnovšie údaje (2024-2025)

Prospektívna kohortová štúdia ukázala, že Huaierove granule významne predlžujú prežívanie bez progresie a znižujú riziko metastáz 47%.

Zdroj: Hui Li, a kol. – Frontiers in Pharmacology – 27.03.2025 – Zlepšenie výsledkov prežívania pri neresekovateľnom hepatocelulárnom karcinóme: prospektívna kohortová štúdia o účinkoch Huaierových granúl s cielenou liečbou a imunoterapiou

Po mikrovlnnej ablácii preukázalo dlhodobé užívanie granulátov Huaier zlepšené 3- a 5-ročné miery prežitia a znížené riziko extrahepatálnych metastáz.

Zdroj: Kailing Xi, e.a. - Frontiers in Pharmacology - 07/05/2024 - Dlhodobé perorálne podávanie Huaierových granúl zlepšuje výsledky prežívania u pacientov s hepatocelulárnym karcinómom v rámci milánskych kritérií po mikrovlnnej ablácii: analýza porovnania skóre náchylnosti a stabilizovanej inverznej váhy pravdepodobnosti

Vedecké dôkazy sa v súčasnosti zameriavajú na HCC, zatiaľ čo údaje o metastázach z iných orgánov do pečene sú obmedzené.

Aktívne zložky

Hlavné účinné zložky huby Huaier sa delia na

1. β-glukány (beta-glukány) - 20-30% extraktu

  • Polysacharidy s 1,3- a 1,6-glykozidové väzby
  • Aktivácia Toll-like receptorov (TLR2, TLR3, TLR6) na imunitných bunkách
  • Stimulovať prirodzené zabíjačské bunky (NK bunky) a Makrofágy
  • Zvýšenie produkcie cytokínov TH1 (IFN-γ, IL-2, TNF-α)

2. polysacharidy (celkovo 30-40% extraktu)

  • Upravte črevná mikroflóra
  • Podporujú produkciu mastných kyselín s krátkym reťazcom (SCFA)
  • Tým sa aktivujú receptory viazané na G proteíny (GPR43, GPR109A)
  • Vedie k epigenetickým zmenám v imunitných bunkách

3. bioaktívne metabolity

  • Polysacharidy s rozvetvenou štruktúrou
  • Triterpény
  • Fenolové zlúčeniny s antioxidačným účinkom

Kedy má užívanie granúl Huaier účinok?

Prívod by mal byť v priamom spojení s

  • konvenčná chirurgia (urýchľuje hojenie rán)
  • Chemoterapia (regeneruje ribozomálnu RNA, zabraňuje vedľajším účinkom)
  • Ožarovanie
    (po predchádzajúcej diskusii s ošetrujúcim onkológom a jeho znalosti tohto obsahu)
  • hormonálnu liečbu, pretože nie sú známe žiadne interakcie
  • imunoterapia vďaka synergickému účinku

Ak sa granule Huaier užívajú pravidelne v odporúčanom dávkovaní, možno pozorovať nasledujúce účinky:

Deň 1-7:

  • β-glukány aktivujú makrofágy a NK bunky
  • Spustí sa prvá imunitná reakcia

1.-2. týždeň:

  • reaktivácia transkripčných faktorov
  • Prvé zmeny expresie génov v rakovinových bunkách

2.-4. týždeň:

  • Masívne prepínanie expresie génov (1000 génov)
  • Hippova dráha sa opravuje
  • Prvá apoptóza (bunková smrť) v rakovinových bunkách

4.-12. týždeň:

  • EMT je zablokovaná (prevencia metastáz)
  • Angiogenéza je potlačená (nádor hladuje)
  • Imunitný systém je úplne preškolený

Mesiac 3+:

  • Stabilná kontrola zvyšných rakovinových buniek
  • Zabraňuje recidívam a metastázam
  • Regenerácia normálnych buniek (najmä po chemoterapii)

Odporúčané dávkovanie

D.

Nasledujúce odporúčané dávkovanie vyplýva z vyššie uvedených štúdií a platí pre všetky typy rakoviny, ktoré reagujú na Huaier (pozri vyššie).
Nasleduje praktický príklad pre metastatický karcinóm prsníka po resekcii a odstránení 7 postihnutých lymfatických uzlín, odporúčanie dávkovania založené na dôkazoch vo vzťahu k Granule Nutrimentas s polysacharidmi 32% takto:

Fáza 1: Akútna fáza - po resekcii 1.-4. týždeň

Nádorová záťaž: vysoká (7 postihnutých lymfatických uzlín, riziko metastáz)

Odporúčané celkové denné množstvo: 60 g

  • Rozdelené: 3 × 20 g denne (ráno, poludnie, večer)
  • Čas: najlepšie nalačno alebo medzi jedlami

obsah účinnej látky v tejto fáze:

  • 60 g × 32% = 19,2 g polysacharidov
  • Z toho najmenej: 60 g × 28% = 16,8 g β-glukánov

Príprava na dávku:

  1. Nasypte 20 g granúl do šálky
  2. Zalejte ju približne 100 ml horúcej vody (80 °C)
  3. Dobre premiešajte, kým sa úplne nerozpustí
  4. Naplňte približne 250 ml vlažnej vody
  5. Pite pomaly

Fáza 2: Konsolidačná fáza - týždne 5-12

Po stabilizácii a úvodnej kontrole

Odporúčané celkové denné množstvo: 30 g

  • Rozdelené: 3 × 10 g

obsah účinnej látky v tejto fáze:

  • 30 g × 32% = 9,6 g polysacharidov
  • Z toho najmenej: 30 g × 28% = 8,4 g β-glukánov

Táto dávka predstavuje štandardnú dávku v onkológii a používa sa vo väčšine štúdií.

Fáza 3: Udržiavacia fáza - od 4. mesiaca počas ďalších 6-12 mesiacov

Prevencia recidív a metastáz

Odporúčané celkové denné množstvo: 15 g

  • 3 × 5 g denne = 15 g

Obsah účinnej látky za deň

  • 15 g × 32% = 4,8 g polysacharidov
  • Z toho najmenej: 15 g × 28% = 4,2 g β-glukánov

Dôležité poznámky:

  • Dôležitá je dôslednosť: Denný príjem bez prerušenia je nevyhnutný pre optimálny účinok
  • Priebežná aplikácia: Aby sa zabezpečili terapeutické účinky, malo by sa v užívaní pokračovať najmenej 6-12 mesiacov.
  • Môže sa kombinovať s konvenčnou medicínou: Nie sú známe žiadne interakcie
  • Šetrné k žalúdku: Lepšie sa znáša, ak sa granule užívajú nalačno
  • Kompatibilita: Počas prvých 1-2 týždňov sa môžu objaviť mierne detoxikačné reakcie (únava, bolesti hlavy). Sú normálne a rýchlo ustúpia.

Kontrolné vyšetrenia

Východisková hodnota - pred užitím lieku Huaier

Krvné testy:

  • Nádorové markery: CEA (karcinoembryonálny antigén) - relevantný pre rakovinu prsníka
  • Nádorové markery: CA 15-3 (obzvlášť dôležité pri rakovine prsníka)
  • Nádorové markery: CA 27.29 (dodatočne pre hrudník)
  • Nádorové markery: HER2/nový (ak ešte nie je známe)
  • Kompletný krvný obraz: RBC, WBC, Hemoglobín, Hematokrit, Trombocyty
  • Funkcia pečene: AST, OLD, GGT, Bilirubín (dôležité, pretože pri metastázach je možné poškodenie pečene)
  • Funkcia obličiek: Kreatinín, BUN, GFR
  • Zápalové markery: CRP, sedimentácia erytrocytov (ISR)
  • Imunitná funkcia: Počet lymfocytov (CD4, CD8, NK bunky, ak je to možné)

Nádorové markery - špecifická interpretácia pri rakovine prsníka

CEA (karcinoembryonálny antigén)

  • Normálne: < 2,5 ng/ml (< 5 ng/ml u fajčiarov)
  • Čo znamená zvýšenie? Relaps alebo metastatické ochorenie
  • Citlivosť: 50-70% pre metastázy

CA 15-3 (Rakovinový antigén 15-3)

  • Normálne: < 25 U/ml (niektoré laboratóriá < 35 U/ml)
  • Čo znamená zvýšenie? Obzvlášť dôležité pri metastázach rakoviny prsníka
  • Citlivosť: 70-80% pre metastázy, len 25% pre včasné štádium

CA 27.29

  • Normálne: < 38 U/ml
  • To znamená: Marker špecifický pre rakovinu prsníka
  • Ďalšie informácie o CA 15-3

Výklad podľa Huaiera:

  • Dobré znamenie: Markery kontinuálne klesajú alebo sa stabilizujú na nízkej úrovni
  • Varovný signál: Neustály nárast napriek Huaier (= prípadne Neodpovedajúci používateľ*)
  • Poznámka: Jednotlivé namerané hodnoty nie sú príliš dôležité, rozhodujúce sú trendy!
*Rozpoznať osoby, ktoré nereagujú

Varovné signály naznačujú nedostatočnú účinnosť Huaier pri tomto dávkovaní:

  • Nádorové markery sa neustále zvyšujú (napriek pravidelnému príjmu Huaier)
  • Lymfocyty zostávajú nízke (< 20%)
  • CT/MRI ukazuje progresiu nádoru
  • Nové metastázy pri zobrazovaní
  • Klinické zhoršenie (úbytok hmotnosti, strata výkonnosti)

V tomto prípade by sa mala denná dávka Huaier zvýšiť na 30-40 g/deň.

Príznaky pozitívneho účinku

Krvné laboratóriá:

  • ✓ Nádorové markery kontinuálne klesajú
  • ✓ Zvýšenie počtu lymfocytov
  • ✓ Normalizácia funkcie pečene a obličiek
  • ✓ CRP (hodnota zápalu) sa po počiatočnom zvýšení normalizuje

Zobrazovanie:

  • ✓ Regresia alebo stabilizácia nádoru
  • ✓ Redukcia lymfatických uzlín
  • ✓ Žiadne nové metastázy

Klinický stav:

  • ✓ Rastúca energia
  • ✓ Zlepšenie chuti do jedla
  • ✓ Lepšia kvalita spánku
  • ✓ Psychologická stabilizácia
  • ✓ Rast vlasov (signál pre aktiváciu kmeňových buniek)

Parametre krvného obrazu

Zmeny očakávané pri užívaní lieku Huaier:

Lymfocyty (normálne: 20-40% WBC)

  • Očakávaná zmena: ↑ zvýšenie (= dobré znamenie, aktivácia imunitného systému)
  • Cieľ: > 30%, ideálne > 35%

Hemoglobín (normálne: 12-16 g/dl u žien)

  • Očakávaná zmena: ↑ Stabilizácia/mierny nárast
  • Huaier podporuje krvotvorbu (dôležité po chemoterapii)

Počet krvných doštičiek (normálne: 150-400 K/μl)

  • Očakávaná zmena: ↑ Stabilizácia/zvýšenie
  • Huaier tu tiež podporuje krvotvorbu

CRP (normálne: < 3-5 mg/l)

  • Očakávaná zmena: ↑ Mierny nárast v 1-2. týždni (= imunitná odpoveď)
  • Potom ↓ pokles v 3.-4. týždni (= dobré znamenie)
  • Vykazuje aktiváciu imunitného systému

Zobrazovanie (základná línia):

  • CT hrudníka + brucha (hľadanie metastáz v pľúcach a pečeni)
  • Scintigrafia skeletu alebo PET-CT (vyhľadávanie kostných metastáz)
  • Lokoregionálne hodnotenie (miesto operácie, axilárne lymfatické uzliny)
  • Nepovinné: MRI pečene (ak je podozrenie na postihnutie pečene)

Fáza 1: Akútna fáza - týždne 1-4

Dávkovanie: 3 × 20 g denne = 60 g/deň

2. týždeň

  • Klinické hodnotenie:
    • Tolerancia, vedľajšie účinky, úroveň energie
    • Chuť do jedla, kvalita spánku
    • Gastrointestinálna tolerancia (nevoľnosť, hnačka)
  • Laboratóriá (nepovinné, len ak sú k dispozícii):
    • Rýchly krvný obraz (WBC, Lymfocyty)
    • CRP (zápal)
    • Nádorové markery (CEA, CA 15-3) - často ešte príliš skoro na výraznú zmenu

4. týždeň

  • Klinické hodnotenie: Celkový stav, hojenie rán (ak boli nedávno operované)
  • Krvné testy:
    • Nádorové markery: CEA, CA 15-3, CA 27.29 (kontrola prvej odpovede)
    • Kompletný krvný obraz (WBC, Lymfocyty, Hemoglobín)
    • Funkcia pečene (AST, OLD, GGT, Bilirubín)
    • Funkcia obličiek (Kreatinín, GFR)
    • CRP (marker zápalu)
    • Ak je k dispozícii: Lymfocytový profil (Pomer CD4/CD8, Počet buniek NK)
  • Poznámky
    • ✓ V tejto fáze (prvá „detoxikácia“) môžu nádorové markery ešte mierne stúpnuť
    • ✓ Počet lymfocytov je často zvýšený (imunitná aktivácia)
    • ✓ CRP môže byť mierne zvýšený (imunitná reakcia)

Fáza 2 - Konsolidačná fáza - týždne 5-12

Zníženie dávky na: 3 × 10 g denne = 30 g/deň

týždeň 6

  • Klinické hodnotenie: Úroveň energie, sťažnosti na príznaky

8. týždeň

  • Zobrazovanie:
    • CT hrudníka + brucha (prvá kontrola obrazu)
    • Otázka: Regresia veľkosti primárneho nádoru? Nové metastázy? Regresia lymfatických uzlín?
    • Porovnanie so základnou úrovňou
  • Krvné testy:
    • Nádorové markery: CEA, CA 15-3, CA 27.29
    • Kompletný krvný obraz
    • Funkcia pečene
    • Funkcia obličiek
    • Imunitné markery (ak sú k dispozícii)
  • Poznámky
    • ✓ Nádorové markery by teraz mali začať klesať (alebo byť stabilné)
    • ✓ Zobrazenie by malo ukázať počiatočnú regresiu alebo stabilizáciu
    • ✓ Trvalo zvýšený počet lymfocytov (dobré znamenie)

12. týždeň

  • Krvné testy:
    • Nádorové markery (CEA, CA 15-3, CA 27.29)
    • Kompletný krvný obraz
    • Funkcia pečene
  • Klinické hodnotenie:
    • Rozhodnutie v prospech tretej fázy?
    • Hodnotenie respondentov a nereagujúcich respondentov

Fáza 3 - udržiavacia fáza - od 4. mesiaca počas 6-12 mesiacov

Dávkovanie: 3 × 5 g denne = 15 g/deň (prípadne 2 × 5 g = 10 g/deň)

Mesiac 4 (16. týždeň)

  • Krvné testy:
    • Nádorové markery: CEA, CA 15-3, CA 27.29 (hodnotenie reakcie)
    • Kompletný krvný obraz
    • Funkcia pečene, funkcia obličiek
    • Imunitné markery
  • Klinické hodnotenie:
    • Celkové hodnotenie doterajšej úspešnosti liečby
    • Kompatibilita, kvalita života
    • Možná úprava dávkovania na základe markerov

Mesiac 6 po začiatku

  • Zobrazovanie (KRITICKÉ):
    • CT hrudníka + brucha alebo PET-CT
    • Porovnanie so zobrazením v 8. týždni a východiskovou hodnotou
    • Cieľ: Potvrdenie stabilného ochorenia alebo ďalšej regresie
  • Krvné testy:
    • Nádorové markery (CEA, CA 15-3, CA 27.29)
    • Kompletný krvný obraz
    • Funkcia pečene, funkcia obličiek
    • CRP
    • Hormonálne markery (ak sa plánuje hormonálna liečba)

Mesiac 9

  • Krvné testy:
    • Nádorové markery
    • Kompletný krvný obraz

12. mesiac

  • Zobrazovanie (FOLLOW-UP):
    • CT hrudníka + brucha alebo PET-CT
    • Hodnotenie dlhodobých reakcií
    • Vyhľadávanie oneskorených metastáz
  • Krvné testy (KOMPLETNÉ):
    • Nádorové markery: CEA, CA 15-3, CA 27.29
    • Kompletný krvný obraz
    • Funkcia pečene, funkcia obličiek
    • CRP
    • Imunitné markery (ak je k dispozícii)

Dlhodobé monitorovanie od roku 2

Dávkovanie: 2 × 3-5 g denne = 6-10 g/deň (udržiavacia dávka)

Každé 3 mesiace:

  • Krvné testy: Nádorové markery (CEA, CA 15-3, CA 27.29) + kompletný krvný obraz

Každých 6 mesiacov:

  • CT alebo MRI (v závislosti od protokolu onkológa)
  • Kompletný krvný test

Každoročne:

  • Kompletné základné vyšetrenia (ako na začiatku)
  • Komplexné zobrazovanie

Funkcia - medicínsky a technicky vysvetlená

1. hrochova cesta

Normálna funkcia Hippovej dráhy je nasledovná:

Aktívna signálna dráha Hippo
    ↓
YAP1/TAZ sú fosforylované a inaktivované
    ↓
Zastaví sa transkripcia rastových génov
    ↓
Apoptóza (bunková samovražda) alebo zastavenie bunkového cyklu
    ↓
Nádor nerastie

Pri rakovine (narušená Hippova dráha):

Postup v prípade narušenia Hippo dráhy, napr. pri rakovine:

Inhibícia/mutácia signálnej dráhy Hippo
    ↓
YAP1/TAZ zostávajú aktívne (defosforylované)
    ↓
Nekontrolovaná transkripcia rastových génov
    ↓
Bunkový rast je hyperaktívny
    ↓
Rakovina rastie nekontrolovane

Užívanie Huaier aktivuje polysacharidy a metabolity Huaier:

  • LATS1/2 kinázy (Predchádzajúce regulátory dráhy Hippo)
  • Táto stránka opätovne fosforylovaný YAP1/TAZ
  • YAP1/TAZ znovu sa stať inaktivované
  • Obnoví sa normálny mechanizmus kontroly bunkového cyklu

2. korekcia transkripčnej dysregulácie

Pri rakovine sa vypínajú tisíce génov: Gény, ktoré by mali byť zapnuté, sú vypnuté a naopak.
Huaier reaktivuje transkripčné faktory:

  • NF-κB (riadi imunitnú odpoveď a prežívanie buniek)
  • c-Myc, Oct3/4, Sox2, Klf4 (Faktory pluripotencie - aktivujú funkciu kmeňových buniek)
  • p53 (nádorový supresor - indukuje apoptózu)
  • TCF/LEF (efektory signálnej dráhy Wnt)

Okrem toho sa expresia hromadných génov zvráti (podľa štúdie Tanaka do 4 týždňov).

12 000 až 25 000 nových génov (normálne bunky ich majú celkovo len ~20 000) a 8 000 až 15 000 je umlčaných (vypnuté)

To vedie k masívnemu „preprogramovaniu“ rakovinovej bunky:

  • Návrat k vlastnostiam kmeňových buniek (nediferencované)
  • Aktivujú sa cesty apoptózy
    Alebo:
  • Prebieha diferenciácia na normálny typ buniek (špecializácia buniek)

Prostredníctvom reaktivácie génov kmeňových buniek (c-myc, október 3/4), rakovinová bunka sa stáva opäť citlivou na normálne kontrolné mechanizmy.

3. Modulácia signálnej dráhy PI3K/AKT/mTOR

Normálne (inhibované):

PI3K aktívny → AKT aktívny → mTOR aktívny → inhibícia rastu buniek ✓
(Je to príliš zjednodušené, ale ide o koncept)

Na rakovinu (hyperaktívne):

Nadmerná aktivita PI3K → nadmerná aktivita AKT → hyperaktivita mTOR → nekontrolovaný rast ✗
(Toto je jedna z najčastejších porúch rakovinových buniek)

Huaier má za následok, že

  • PTEN aktivovaný (negatívny regulátor PI3K)
  • Komplexy TSC1/TSC2 stať sa obnovené (inhibícia mTOR)
  • PI3K/AKT/mTOR sa prevedie na normálnu Bilancia vrátil
  • Rast buniek je opäť kontrolovateľný

Poznámka: Táto trasa je vhodná najmä pre HER2-negatívny a Trojité negatíva Rakovina prsníka je príliš aktívna.

4. transkripčná kontrola sprostredkovaná miRNA a piRNA

MikroRNA (miRNA, malé kúsky RNA (molekuly) s dĺžkou 20-22 nukleotidov) sú zvyčajne „brzdou“ pre chybné gény. Pri rakovine sú tieto brzdy narušené:

  • Onkogény už nie sú inhibované
  • Tumor supresorové gény sú príliš spomalené

Huaier sa stará o Obnovenie funkcie miRNA:

  • miR-122 (inhibuje rast HCC)
  • miR-145 (inhibuje gény kmeňových buniek v normálnych bunkách)
  • klaster miR-17/92 (je aktivovaný c-myc, môže potom indukovať apoptózu)

Aktivujú sa nové miRNA, ktoré:

  • Onkogény (napr. KRAS, PIK3CA) vypnúť
  • Tumor supresorové gény (TP53, RB) posilniť
  • Angiogenéza (tvorba krvných ciev) inhibovať
  • Epitelovo-mezenchýmový prechod (EMT) blok → Blokuje metastázy

Štúdia Tanaka: Stovky nových miRNA-varianty, ktoré špecificky „stlmujú“ rakovinové bunky.

5. aktivácia imunitného systému (vrodený imunitný systém)

β-glukány ako ligandy na rozpoznávanie vzorov:

β-glukány (od Huaier)
    ↓
Väzba na Dectin-1 a TLR receptory na imunitných bunkách
    ↓
Aktivácia makrofágov a NK buniek
    ↓
Sekrécia prozápalových cytokínov:
    - TNF-α (tumor nekrotizujúci faktor)
    - IL-12 (interleukín-12)
    - IFN-γ (interferón-gama)
    ↓
Aktivácia cytotoxických T-buniek (CD8+)
    ↓
Rozpoznávanie a lýza nádorových buniek

Imunitný systém sa prakticky „prebudí“ a opäť rozpozná rakovinové bunky ako nepriateľov.

6. blokáda epiteliálno-mezenchymálneho prechodu (EMT)

Proces EMT spôsobuje, že rakovinové bunky strácajú priľnavosť k svojmu podkladu, čo im umožňuje migrovať po celom organizme, a tak viesť k metastázam:

  • Bunky stratiť E-Cadherin (bunkové lepidlo)
  • Bunky exprimovať vimentín (pohybový proteín)

Huaier sa stará o

  • Stabilizácia z adresy E-Cadherin (bunky sa opäť „zlepia“)
  • obmedzenie z adresy Vimentín (bunky môžu menej „migrovať“)
  • Únik z adresy Slimák-, Slimák- a Faktory zvratu (induktory EMT)
  • Stabilizácia z adresy β-Catenin (udržiava normálnu funkciu epitelu)

Tým sa mechanicky zablokuje tvorba metastáz, a to aj v prípade existujúcich metastáz v lymfatických uzlinách.

7. blokovanie angiogenézy (tvorby krvných ciev)

Nádory môžu rásť len vtedy, ak sa v nich vytvárajú nové cievy (angiogenéza). Tú riadi VEGF (vaskulárny endotelový rastový faktor).

Huaier tomu čelí tým, že

  • Inhibícia expresie VEGF sa stáva
  • Zablokované signálne dráhy VEGFR stať sa
  • Znížená regulácia HIF-1α (faktor indukovaný hypoxiou) sa stáva
  • alternatíva proangiogénne dráhy (FGF, Notch) inhibovali stať sa

Výsledok: Nádor stráca prívod krvi - rast nádoru je zastavený.

8. oprava štruktúry ribozomálnej RNA

Problém po chemoterapii:

  • Chemoterapeutiká, najmä komplexy platiny, ako je cisplatina, ničia štruktúry ribozomálnej RNA
  • Ribozómy sú továrne na bielkoviny v bunke
  • Bez funkčných ribozómov bunka nemôže produkovať proteíny

Aj keď nádor odumrie, zdravé bunky sa nemôžu obnoviť.

Huaier tu zasahuje a

  • opravuje štruktúry ribozomálnej RNA
  • poskytuje . Obnovuje schopnosť syntézy bielkovín

To umožňuje regeneráciu zdravých buniek, zatiaľ čo rakovinové bunky opäť odumierajú. To vysvetľuje, prečo majú pacienti podstupujúci chemoterapiu menej vedľajších účinkov a rýchlejšie sa zotavujú.

Imunologicky relevantné gény

Regulačné správanie génov

Gény môžu byť 0% Expresia (prakticky zodpovedá vypnutiu) alebo s ľubovoľným percentom ich maximálnej kapacity, alebo s 100% Expresia (pre úplnú AN).

Faktor nádorovej nekrózy α

Regulačné správanie a jeho dôsledky sú vysvetlené na príklade tumor nekrotizujúceho faktora α (TNFα):

Normálna “hodnota“ je expresia 40%, dostatočná na ochranu pred infekciami, príliš malá na napadnutie tkaniva.

Ak hodnota stúpne na 100% (alebo ešte vyššie), napr. pri reumatoidnej artritíde, má to za následok

  • masívny nadbytok TNF-α
  • Trvalý zápal kĺbov
  • Deštrukcia chrupavky a kosti
  • systémový zápal

a príznaky trvalej bolesti a opuchu kĺbov.

Ak sa však hodnota zníži napríklad len na 5%, potom to vedie k tomu, že

  • Príliš málo TNF-α na zabíjanie patogénov
  • Neobmedzený rast baktérií
  • Systémové zlyhanie orgánov
  • Možnosť úmrtí

Záver: TNF je životne dôležitý!

Spektrum cytokínu IL-6 (interleukín 6)

  • Vypnutie zvuku - 0-5% kontrolnej hodnoty
    Žiadna reakcia akútnej fázy, žiadna horúčka
    Infekčná slepota
  • Veľmi tichý - 5-15% kontrolnej hodnoty
    Minimálna zápalová reakcia
    Slabá imunita
  • Tichý - 15-30% kontrolnej hodnoty
    Mierny lokálny zápal
    NORMÁLNE po menšej infekcii
  • Mierne - 30-50% kontrolnej hodnoty
    Jasný, ale obmedzený zápal
    NORMÁLNE v prípade infekcie
  • Podľa - 50-80% kontrolnej hodnoty
    Závažný systémový zápal
    Príliš veľa? Pre RA, IBD
  • Veľmi hlasný - 80-95% kontrolnej hodnoty
    Masívny systémový zápal
    Sepsa, šok
  • Maximum - 95-100%+ kontrolnej hodnoty
    Cytokínová búrka, zlyhanie orgánov
    Fatálne (COVID-19, sepsa)

Príklad nízkej expresie

  • TNF-α na úrovni 90% namiesto 40% kontrolnej hodnoty
    Autoimunitný zápal
  • IL-17 pri 85% namiesto 30% kontrolnej hodnoty
    Nadprodukcia Th17 vedie k nadmerným zápalovým reakciám
  • IL-6 pri 95% namiesto 45% kontrolnej hodnoty
    Chronická artritída

Príklad nadmerného vyjadrovania

  • TNF-α na úrovni 10% namiesto 40% kontrolnej hodnoty
    Riziko tuberkulózy
  • IL-10 na úrovni 8% namiesto 35% kontrolnej hodnoty
    Nekontrolovaný zápal
  • IFN-γ pri 12% namiesto 50% kontrolnej hodnoty
    Citlivosť na vírusy

Metódy merania

Regulácia génov prebieha na viacerých biologických úrovniach. Na pochopenie týchto úrovní existujú štyri hlavné metódy merania, ktoré kvantifikujú rôzne aspekty expresie génov:

  1. Úroveň 1: Transkripcia (DNA → mRNA)
    Metóda merania: qRT-PCR
  2. Úroveň produkcie proteínov (mRNA → proteín v bunke)
    Metóda merania: Western Blotting
  3. Úroveň 3: Vylučovanie/cirkulácia (proteín v sére/plazme)
    Metóda merania: ELISA
  4. Úroveň 4: Bunkový prejav na úrovni jednej bunky
    Metóda merania: Prietoková cytometria

1. qRT-PCR (kvantitatívna PCR s reverznou transkripciou)

qRT-PCR meria množstvo mRNA v bunkách alebo tkanivách v meranom a „viacnásobnom“

  • Zmena skladania (viacnásobná): Príklad: TNF-α mRNA sa zvyšuje 2,5-násobne
    • Významnosť: 2,5× vyššia ako u kontrolnej skupiny
    • Hodnota 0,45 znamená: 45% kontroly (t. j. znížená regulácia)
  • Prahová hodnota cyklu (Ct): Surová hodnota, koľko cyklov PCR je potrebných do detekcie
    • Nižšia Ct = viac prítomnej mRNA
    • Vyššia Ct = menej prítomnej mRNA

Čo qRT-PCR nemeria:

  • absolútne množstvo bielkovín
  • aktivita proteínu
  • či bol proteín vylúčený
  • koncentrácia v sére

Klinická interpretácia

qRT-PCR: TNF-α = 2,5-násobok

Znamená: "TNF-α mRNA je 2,5× vyššia ako normálne".
          "Génová 'regulácia hlasitosti' je zvýšená"
          
ALE: Toto nehovorí NIC o skutočnom množstve proteínu TNF-α v sére!
Prietoková cytometria ukazuje, že ani vysoká mRNA automaticky nevytvára veľké množstvo proteínu na bunku, a ak aj áno, stále sa musí vylučovať. Preto 8,3-násobné zvýšenie mRNA v nasledujúcom príklade môže viesť k väčšiemu alebo menšiemu množstvu proteínu v bunkách.

Praktický príklad

Pacient s bakteriálnou infekciou:
qRT-PCR (krvné leukocyty): TNF-α = 8,3-násobné zvýšenie
→ Bunky produkujú veľa mRNA
→ ale tá nie je okamžite merateľná v sére
→ pretože proteín sa do séra dostane až po približne 30 minútach až hodinách.

2. Western blot

Western Blot meria množstvo bielkovín v rámci buniek alebo tkanív v meraní „intenzity pásov“, stavu fosforylácie (aktivovaný vs. neaktívny proteín) a rôznych izoforiem proteínov.

  • Relatívna intenzita pásma: 0-100% alebo ako násobok na kontrolné účely
  • Príklad: Proteín IL-6 = 65% intenzity kontroly
    • Význam: Proteín je rovnako silne exprimovaný v 65% ako v kontrole

Čo Western Blotting NEmeria:

  • či je proteín aktívny (len prítomnosť)
  • či bol proteín vylúčený
  • koncentrácia v sére/krvi
  • na úrovni jednotlivých buniek

Klinická interpretácia:

Western blot: Proteín TNF-α = 72% intenzity kontroly

Znamená: "Proteín TNF-α je v bunkovom lyzáte prítomný pri intenzite 72%".
          "72% toľko proteínu ako v kontrolnej bunkovej kultúre"
          
ALE: Toto nehovorí NIC o:
      - Koľko TNF-α sa skutočne vylúčilo
      - Koľko TNF-α je v sére
      - či je proteín aktívny alebo nie

Praktický príklad:

Kultivácia makrofágov so stimuláciou LPS:
Western blotting (bunkový lyzát): TNF-α = 85% kontroly
ELISA (supernatant kultúry): TNF-α = 2 800 pg/ml

Záver: Produkovalo sa veľa proteínu TNF-α a vylučoval sa

3. enzýmový imunosorbentný test (ELISA)

ELISA meria absolútnu koncentráciu proteínu v sére, plazme, supernatante bunkových kultúr alebo iných telesných tekutinách v absolútnej koncentrácii.

  • pg/ml (pikogram na mililiter)
    pre cytokíny ako TNF-α, IL-6
  • ng/ml (nanogram na mililiter)
    pre koncentrovanejšie proteíny
  • µg/ml (mikrogramy na mililiter)
    pre veľmi vysoké koncentrácie

Normálne hodnoty TNF-α (príklad):

Zdravý:  5 000 pg/ml (môže byť fatálna)

Čo meria ELISA:

  • Absolútne množstvo vylučovaného/cirkulujúceho proteínu
  • či sa proteín skutočne dostal do krvi/séra
  • systémový účinok (nielen lokálne v bunke)

Čo ELISA nemeria:

  • koľko mRNA je prítomné
  • koľko bielkovín je v bunkách
  • či je proteín aktívny
  • na úrovni jednotlivých buniek

Klinická interpretácia:

ELISA: TNF-α v sére = 65 pg/ml

Znamená: "je prítomných 65 pikogramov TNF-α na mililiter séra"
          "To je 3-13× viac ako normálna hodnota"
          "Existuje stredne silný zápal"
          
Ide o ABSOLÚTNU koncentráciu, nie relatívnu!

Praktický príklad:

Pacient s reumatoidnou artritídou:
ELISA: TNF-α = 85 pg/ml (norma: < 20 pg/ml)
qRT-PCR (krv): TNF-α mRNA = 3,2-násobné zvýšenie
Western blotting (kĺbová synovia): TNF-α = 95% (lokálne veľmi vysoké)

Záver: Príliš veľa TNF-α všade, od mRNA cez bunkové bielkoviny až po sérum

4. prietoková cytometria

Prietoková cytometria meria expresiu proteínov alebo markerov na povrchu alebo vo vnútri jednotlivých buniek v percentách a intenzitu fluorescencie.

  • % pozitívne bunky: Príklad: 78% CD4+ T buniek exprimuje IL-2
    • Význam: 78% tejto bunkovej populácie má charakteristické
  • Priemerná intenzita fluorescencie (MFI): 0-10 000+ (v závislosti od prístroja)
    • Príklad: expresia IL-2 MFI = 450 v CD4+ T-bunkách
    • Vyšší MFI = viac proteínu na bunku

Čo meria prietoková cytometria:

  • Koľko buniek určitej populácie exprimuje antigén (%)
  • Koľko antigénu je prítomného v jednej bunke (MFI)
  • Bunková heterogenita (nie všetky bunky sú rovnaké!)
  • Markery na povrchu buniek a vnútrobunkové proteíny

Čo prietoková cytometria NEMERIA:

  • Sérová koncentrácia (meria bunky, nie sérum)
  • Množstvo mRNA - Koľko je v tele celkovo -
    Na nepriame extrapolácie možno použiť ďalšie údaje (počet buniek, hmotnosť atď.):
    Táto extrapolácia je však len odhadom, nie je taká presná ako ELISA
    a zaznamenáva len merané bunky (napr. krvné makrofágy), nie tkanivové makrofágy!

Klinická interpretácia:

Prietoková cytometria: 73% CD8+ T buniek exprimuje IFN-γ
                MFI = 520

Znamená: "73% cytotoxických T buniek má proteín IFN-γ".
          "Priemerný obsah IFN-γ na bunku je 520 (MFI)"
          "Odpoveď T buniek je aktívna"
          
ALE: Toto nehovorí NIC o:
      - Koľko celkového IFN-γ je v sére
      - koľko mRNA IFN-γ je prítomná

Praktický príklad:

Pacient s COVID-19 (3. deň po infekcii):
Prietoková cytometria:
  - 91% CD8+ T bunky exprimujú IFN-γ (vysoký!)
  - MFI = 1,250 (veľmi vysoký)
  
ELISA: IFN-γ v sére = 180 pg/ml (norma: < 50)

Záver: Silná produkcia IFN-γ aktivovaná T-bunkami, systémovo merateľná
Značky:

Pridaj komentár

Vaša e-mailová adresa nebude zverejnená. Vyžadované polia sú označené *